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高速冷凍離心機在基因提取中的應用

更新時間:2016-11-09   點擊次數:1591次
   高速冷凍離心機在基因提取中的應用
  乙醇被*為是一種可以替代汽油的液體燃料,也是很好的燃油品質改善劑,甘蔗可以生成乙醇燃料。為提高甘蔗發酵效率,可提取釀酒酵母a288c基因組,克隆INO1基因,在工業釀酒酵母中過表達,提高菌種耐乙醇能力,提高細胞活力。下面簡單介紹下提取和擴增過程。
  釀酒酵母基因組提取
  原始釀酒酵母菌株s288c活化后,使用YPD固體培養基進行平皿劃線分離得到釀酒酵母菌株s288c單菌落,牙簽挑取單菌落接至50ml YPD液體培養基進行30 ℃搖瓶培養24-30 h,用高速冷凍離心機去上清(采用高速冷凍離心機保護樣本生物活性);按照釀酒酵母基因組DNA提取試劑盒提取基因組DNA。
  INO1基因序列擴增
  以釀酒酵母S288C基因組DNA為模板進行PCR擴增。反應條件如下:預變性94℃ 5 min,變性94℃30s,退火54℃ 30s,延伸72℃ 97s,30個循環,延長72℃。10min保存4℃。反應結束后取2 uL PCR擴增產物于1%瓊脂糖凝膠電泳進行檢測。采用膠回收試劑盒進行膠回收。
  回收后的PC產物進行連接、轉化和菌液PCR檢測,z后進行質粒提取和測序。

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